一、慢病毒服務(wù)簡(jiǎn)介慢病毒（Lentivirus）載體是以人類免疫缺陷I型病毒(HIV-1)為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因載體。它是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，能使外源基因整合入宿主的基因組穩(wěn)定、長(zhǎng)期表達(dá)，但卻比一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度和更廣的宿主范圍。攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝載體(表達(dá)病毒包裝所需輔助蛋白)一同轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，即可進(jìn)行病毒的包裝；經(jīng)收集和濃縮的慢病毒液可以直接用于感染宿主細(xì)胞或活體動(dòng)物模型。輝駿生物使用的慢病毒包裝系統(tǒng)是4質(zhì)粒包裝系統(tǒng)，包括1個(gè)慢病毒表達(dá)載體和3個(gè)慢病毒包裝載體(分別表達(dá)病毒包裝必需的蛋白Gag/Pol、Rev和VSV-G)，包裝細(xì)胞為293T細(xì)胞。輝駿生物提供包含多種熒光基因(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標(biāo)簽和多種啟動(dòng)子的慢病毒載體，可充分滿足客戶不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求。 二、慢病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)1>能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導(dǎo)目的基因穩(wěn)定、長(zhǎng)期的表達(dá)；2>慢病毒有更廣泛的宿主范圍，能夠有效地感染分裂細(xì)胞、非分裂細(xì)胞，特別適合于一些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞）和對(duì)腺病毒感染具有較強(qiáng)免疫反應(yīng)的細(xì)胞（如樹(shù)突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞）等；3>適用范圍更廣，不僅能用于體外實(shí)驗(yàn)，還能用于活體動(dòng)物模型。4>不需要轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的概率大大增加；5>可用于研究基因的過(guò)表達(dá)、microRNA過(guò)表達(dá)和RNAi等。6>利用慢病毒建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的時(shí)間較常規(guī)真核表達(dá)載體更短，能大大縮短實(shí)驗(yàn)周期、提高實(shí)驗(yàn)效率。 三、慢病毒技術(shù)整體流程A.慢病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)客戶的不同需要，將目的基因片段連接至慢病毒載體；B.慢病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝；收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后進(jìn)行滴度測(cè)試，得到滴度≥1×10⁸ TU/mL的慢病毒液；C.穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的建立：分別使用實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組慢病毒感染細(xì)胞，利用抗生素初步篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，細(xì)胞分選得到單克隆細(xì)胞株，建立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。 
                                                                      圖1慢病毒技術(shù)服務(wù)整體流程 四、慢病毒表達(dá)載體元件    在慢病毒的包裝系統(tǒng)中，慢病毒表達(dá)載體攜帶病毒包裝和復(fù)制所需的順式作用元件和外源基因表達(dá)盒，3個(gè)包裝質(zhì)粒反式提供病毒包裝必需的蛋白。輝駿生物提供多種慢病毒表達(dá)載體，具體元件如下圖所示，除此之外，客戶還可以根據(jù)需要更換啟動(dòng)子、熒光基因或抗性基因。                      
                                                            圖2慢病毒載體元件示意圖 五、慢病毒技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目表1 慢病毒服務(wù)項(xiàng)目及內(nèi)容
分類服務(wù)編號(hào)項(xiàng)目名稱客戶提供服務(wù)描述RNAi慢病毒服務(wù)FG101RNAi慢病毒載體構(gòu)建目標(biāo)基因登錄號(hào)或序列(1)設(shè)計(jì)并合成1條干擾序列
(2)構(gòu)建載體FG102ARNAi慢病毒包裝套餐A目標(biāo)基因登錄號(hào)或序列(1)設(shè)計(jì)并合成3條干擾序列(保證至少有1個(gè)靶序列的干擾效率大于70%)
(2)分別構(gòu)建3條載體
(3)分別進(jìn)行3次慢病毒包裝FG102BRNAi慢病毒包裝套餐B設(shè)計(jì)好的有效靶點(diǎn)序列(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝
注:可提供多條干擾序列FG103ARNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐A目標(biāo)基因的序列(1)設(shè)計(jì)并合成3條干擾序列
(2)分別構(gòu)建3條載體
(3)分別進(jìn)行3次慢病毒包裝
(4)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(得到至少1個(gè)有效干擾的細(xì)胞株)FG103BRNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐B設(shè)計(jì)好的有效靶點(diǎn)序列(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝
(3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株基因過(guò)表達(dá)慢病毒服務(wù)FG111基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建目標(biāo)基因的模板構(gòu)建載體FG112基因過(guò)表達(dá)慢病毒包裝套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝FG113過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐目標(biāo)基因的模板(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝
(3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株microRNA慢病毒服務(wù)FG121microRNA過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建microRNA前體或初始產(chǎn)物模板構(gòu)建載體FG122microRNA過(guò)表達(dá)
慢病毒包裝套餐microRNA前體或初始產(chǎn)物模板(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝FG123microRNA過(guò)表達(dá)
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建microRNA前體或初始產(chǎn)物模板(1)構(gòu)建載體
(2)慢病毒包裝
(3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 特別提醒：
（1）基因過(guò)表達(dá)慢病毒服務(wù)適用于目標(biāo)基因長(zhǎng)度為2000bp以下的片段，2000bp以上的請(qǐng)具體咨詢；
（2）我公司亦可進(jìn)行基因釣取和WB檢測(cè)服務(wù)，但費(fèi)用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實(shí)際情況收費(fèi)；
（3）客戶如對(duì)所需病毒量（TU）及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×10⁸~1×10⁹ TU/mL之間，規(guī)格為1mL；
（4）若實(shí)驗(yàn)材料為原代細(xì)胞和需要特殊培養(yǎng)的細(xì)胞，請(qǐng)具體咨詢；
（5）客戶亦可根據(jù)特殊要求進(jìn)行慢病毒產(chǎn)品定制服務(wù)。

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果提交
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，我公司會(huì)提交完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括：
1.客戶定制的相應(yīng)載體、病毒液或穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；
2.慢病毒液滴度測(cè)定報(bào)告單；
3.慢病毒載體的測(cè)序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；
4.全部實(shí)驗(yàn)圖片；
5.詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。