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[供應(yīng)]2D Western blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
- 產(chǎn)品產(chǎn)地：廣州
- 產(chǎn)品品牌：輝駿生物
- 包裝規(guī)格：B001
- 產(chǎn)品數(shù)量：999
- 計(jì)量單位：個(gè)
- 產(chǎn)品單價(jià)：1
- 更新日期：2025-07-11 09:50:56
- 有效期至：2035-07-09
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2D Western blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
詳細(xì)信息
一、2DWesternblot概述
2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)westernblot相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。一般實(shí)驗(yàn)流程為抗原蛋白混合物經(jīng)雙向電泳分離，然后將凝膠蛋白轉(zhuǎn)印至支持膜上，再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術(shù)可檢測出抗原等電點(diǎn)或分子量發(fā)生的微小變化，在蛋白翻譯后修飾研究領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用；而2D-WB結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)，還可能從蛋白混合物中找到免疫原性更強(qiáng)的抗原。
二、技術(shù)服務(wù)流程
二、2D Westernblot技術(shù)服務(wù)內(nèi)容
1、蛋白質(zhì)抽提與定量；
2、雙向電泳；
3、轉(zhuǎn)膜，封閉，孵育，顯示成像。
三、送樣須知
樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融，妥善保存，用干冰或液氮包裝寄送；廣州本地客戶可上門收樣。
注：接收組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等樣品；相應(yīng)一抗如果公司抗體庫里沒有，也需要客戶自己提供。
四、2D Westernblot技術(shù)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容
1、蛋白質(zhì)定量結(jié)果及電泳上樣量；
2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結(jié)果；
3、2D Westernblot完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器和試劑等。
五、2D Westernblot實(shí)驗(yàn)服務(wù)案例
六、實(shí)驗(yàn)服務(wù)周期及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：咨詢本公司
七、質(zhì)量承諾：提供清晰、客觀的2D Westernblot結(jié)果。
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附：2DWesternblot實(shí)驗(yàn)步驟：
1、樣本制備，盡可能溶解全部蛋白質(zhì)，破壞蛋白與蛋白間的相互作用，避免其他雜質(zhì)的干擾，與IEF兼容等。
2、雙向電泳的主要步驟，第一向電泳（IEF），膠條平衡，第二向電泳SDS-APGE。
3、第二向電泳結(jié)束后，取出凝膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，可選濕法轉(zhuǎn)移和半干法轉(zhuǎn)移。常用NC膜和PVDF膜。
4、封閉，5%脫脂奶粉或5%BSA封閉1小時(shí)（室溫）或過夜（4度）。
5、一抗孵育，根據(jù)抗體說明書選擇孵育時(shí)間，常規(guī)的孵育條件是室溫1小時(shí)或4度過夜，一抗孵育后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。
6、二抗孵育：根據(jù)一抗選擇合適的二抗（抗鼠、抗人、抗兔等），室溫孵育1小時(shí)后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。
7、顯影：將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上，暗室中將膠片置于膜上，蓋上壓片夾，曝光一定時(shí)間后將膠片放入顯影液中進(jìn)行顯影，直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶，清水漂洗后在定影液中定影，曝光時(shí)間需綜合考慮蛋白質(zhì)的上樣量，抗體稀釋濃度，抗體孵育時(shí)間等。
8、定影后，清洗膠片，晾干，標(biāo)定marker，掃描圖片和2DWesternblot圖片分析。
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